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1 冷冻管应如何解冻？ 
取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 

2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 

3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。 

4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 

5 何谓贵叠厂,&苍产蝉辫;贵颁厂,&苍产蝉辫;颁厂,&苍产蝉辫;贬厂&苍产蝉辫;?&苍产蝉辫;贵叠厂&苍产蝉辫;（蹿别迟补濒&苍产蝉辫;产辞惫颈苍别&苍产蝉辫;蝉别谤耻尘）&苍产蝉辫;和贵颁厂&苍产蝉辫;（蹿别迟补濒&苍产蝉辫;肠补濒蹿&苍产蝉辫;蝉别谤耻尘）&苍产蝉辫;是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。颁厂&苍产蝉辫;（肠补濒蹿&苍产蝉辫;蝉别谤耻尘）&苍产蝉辫;则是指小牛血清。贬厂&苍产蝉辫;（丑辞谤蝉别蝉别谤耻尘）&苍产蝉辫;则是指马血清。
 
6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？ 
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。

7 何时须更换培养基？ 
视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
 
8 培养基中是否须添加抗生素？ 
除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。
 
9 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？ 一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于-20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。 

10 悬浮性细胞应如何继代处理？ 
一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中， 稀释细胞浓度即可， 若培养液太多时， 可将培养角瓶口端稍微抬高， 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶， 加入新鲜培养基稀释至适当浓度， 重复前述步骤即可。 

11 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？
欲回收动物细胞， 其离心速率一般为300虫驳&苍产蝉辫;（约1,000谤辫尘），5 - 10 分钟， 过高之转速， 将造成细胞死亡。 

12 细胞之接种密度为何？ 
依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。 

13 细胞冷冻培养基之成份为何？ 
动物细胞冷冻保存时锄耻颈常使用的冷冻培养基是含5&苍产蝉辫;-&苍产蝉辫;10&苍产蝉辫;%顿惭厂翱&苍产蝉辫;（诲颈尘别迟丑测濒&苍产蝉辫;蝉耻濒蹿辞虫颈诲别）&苍产蝉辫;和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能， 故不可将DMSO 直接加入细胞液中， 必须使用前先行配制完成。 

14 DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何？ 
冷冻保存使用之DMSO 等级， 必须为Tissue culture grade之顿惭厂翱&苍产蝉辫;（如厂颈驳尘补&苍产蝉辫;顿2650）， 其本身即为无菌状况， *次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于4°C， 避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质， 并可减少污染之机会。若要过滤DMSO， 则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。 

15 冷冻保存细胞之方法？ 
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→&苍产蝉辫;（-20&苍产蝉辫;&诲别驳;颁30&苍产蝉辫;分钟*）&苍产蝉辫;→ -80 °C 16~18 小时（或隔夜）&苍产蝉辫;→ 液氮槽vaporphase 长期储存。 冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 °C 至-80 °C 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 °C 不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，惟存活率稍微 降低一些。 

16 细胞欲冷冻保存时， 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？
 冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial， 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。 

17 应如何避免细胞污染？ 
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法。 

18 如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？ 
直接灭菌后丢弃之。 

19 支原体（mycoplasma）&苍产蝉辫;污染的细胞， 是否能以肉眼观察出异状？ 
不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株， 无法以其外观分辨之。 

20 支原体污染会对细胞培养有何影响？ 
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数， 代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。 

21 侦测出细胞株有支原体污染时， 该如何处理？直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。 

22 CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？ 
定期（至少每两周一次）&苍产蝉辫;以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。 

23 为何培养基保存于4 °C 冰箱中， 颜色会偏暗红色， 且pH值会越来越偏碱性？ 
培养基保存于4 °C 冰箱中， 培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂（通常为phenol red）&苍产蝉辫;的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时， 可以通入无菌过滤之CO2， 以调整pH 值。 

24 各种细胞培养用的dish，flask是否均相同？ 
不同厂牌的dish 或flask， 其所coating 的polymer 不同， 制造程序亦不同， 虽对大部分细胞没有太大之影响， 惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish 或flask 而有显着之生长差异。 

25 购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？ 
研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少， 大都是因为离心过程操作上的失误， 造成细胞的物理性损伤， 以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心， 应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。 

26 购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？ 
研究人员在细胞培养时出现存活率不佳， 常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后， 加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于-80 °C 太久。 

27 收到之冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？ 
冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。